Apothekers en chemici komen in hun werk veel natuurlijk voorkomende organische mengsels en mengsels van chemische reacties tegen. Als zodanig is een High Performance Liquid Chromatography (HPLC) -systeem een ​​van de meest essentiële instrumenten voor elk laboratorium. Met een HPLC-instrument kunt u deze mengsels scheiden (kwantitatief en kwalitatief). Bij dit type kolomchromatografie is de deeltjesgrootte van de stationaire fase klein genoeg zodat het moeilijk wordt voor het oplosmiddel om er doorheen te gaan; om dat te ondervangen, wordt een hoge druk van 3000-5000 psi toegepast. Het is de meest gevoelige, efficiënte en nauwkeurige techniek.

Stappen

  1. 1 Volg de regels en voorschriften en draag uw schort.
    • Reinig de HPLC.
    • Schakel het in en wacht tot het begint.
    • Bereid het instrument voor op analyse.
    • Houd het oplosmiddel / de oplosmiddelen in de mobiele fase in het oplosmiddelreservoir of de oplosmiddellade. Oplosmiddel wordt gebruikt om de componenten van het mengsel te scheiden. In moderne instrumenten kan het mengsel van oplosmiddelen worden gebruikt als mobiele fase die gradiëntelutie wordt genoemd. Elutie is de scheiding in componenten.
    • Gebruik methanol-water of chloroform-heptaan etc. als uw oplosmiddel.
  2. 2 Selecteer de soorten HPLC op basis van de relatieve polariteit van de fasen:
    • Normale fase: gebruik een vergelijkende polaire stationaire fase dan mobiele fase als u normale fase-HPLC uitvoert.
    • Reverse Phase HPLC: gebruik een minder polaire mobiele fase in vergelijking met de stationaire fase. Over het algemeen wordt omgekeerde fase gebruikt.
  3. 3 Voer de gegevens in het systeem in of programmeer de HPLC.
    • Wijs het nummer toe aan de oplosmiddelen als u kiest voor gradiëntelutie.
    • Geef de stroomsnelheid op.
    • Regel de druk van de pomp.
  4. 4 Analyseer uw steekproef.
    • Voeg uw monster toe aan het injectorsysteem. Dit is het mechanisme dat het monster (het mengsel dat moet worden gescheiden) in het systeem introduceert.
    • Laad de stationaire fase in de kolom.
    • Start de HPLC door op de startknop op het scherm van de aangesloten computer te klikken.
    • Wacht enige tijd tot het mengsel is gescheiden in componenten. De retentietijd is de tijd die het oplosmiddel nodig heeft om de componenten te scheiden, wat gelijk is aan het tijdstip waarop u het mengsel in de kolom invoert tot wanneer het wordt gedetecteerd / geanalyseerd.
  5. 5 Ontwikkel uw componenten. Wacht tot je mengsel wordt gescheiden in zijn componenten. Dit wordt ontwikkeling genoemd, wanneer de inhoud van het monster door de detector wordt gedetecteerd.
  6. 6 Bekijk het resultaat. Kijk naar de scheiding van componenten die zijn gedetecteerd en opgenomen in de grafiek. Er zullen verschillende pieken zijn die overeenkomen met de componenten en hun concentratie.
  7. 7 Pas uw bevindingen toe op uw werk. Er zijn veel toepassingen van HPLC in de farmacie, chemie en industrieën zoals voedselproductie. Enkele van de belangrijke toepassingen volgen.
    • Gebruik het voor kwalitatieve analyse door retentietijd te vergelijken die werd waargenomen onder identieke omstandigheden.
    • Maak gebruik van HPLC voor kwantitatieve analyse, zoals het bepalen van de concentratie van componenten.
    • Analyseer lipidescheiding.
    • Gebruik het voor antwoorden in forensisch werk over criminele / gifkoffers.